eNOS S-nitrosylates ß-actin on Cys374 and regulates PKC-? at the immune synapse by impairing actin binding to profilin-1
Por:
García-Ortiz A, Martín-Cofreces NB, Ibiza S, Ortega Á, Izquierdo-Álvarez A, Trullo A, Victor VM, Calvo E, Sot B, Martínez-Ruiz A, Vázquez J, Sánchez-Madrid F and Serrador JM
Publicada:
1 abr 2017
Resumen:
The actin cytoskeleton coordinates the organization of signaling microclusters at the immune synapse (IS); however, the mechanisms involved remain poorly understood. We show here that nitric oxide (NO) generated by endothelial nitric oxide synthase (eNOS) controls the coalescence of protein kinase C-theta (PKC-theta) at the central supramolecular activation cluster (c-SMAC) of the IS. eNOS translocated with the Golgi to the IS and partially colocalized with F-actin around the c-SMAC. This resulted in reduced actin polymerization and centripetal retrograde flow of beta-actin and PKC-theta from the lamellipodium-like distal (d)-SMAC, promoting PKC-theta. activation. Furthermore, eNOS-derived NO S-nitrosylated beta-actin on Cys374 and impaired actin binding to profilin-1 (PFN1), as confirmed with the transnitrosylating agent S-nitroso-L-cysteine (Cys-NO). The importance of NO and the formation of PFN1-actin complexes on the regulation of PKC-theta. was corroborated by overexpression of PFN1- and actin-binding defective mutants of beta-actin (C374S) and PFN1 (H119E), respectively, which reduced the coalescence of PKC-theta. at the c-SMAC. These findings unveil a novel NO-dependent mechanism by which the actin cytoskeleton controls the organization and activation of signaling microclusters at the IS.
Filiaciones:
García-Ortiz A:
Dpt. Biología Celular e Inmunología, Centro de Biología Molecular "Severo Ochoa" (CBMSO), CSIC-UAM, Madrid, Spain
Martín-Cofreces NB:
Servicio de Inmunología. Hospital Universitario de la Princesa, Universidad Autónoma de Madrid, Instituto de Investigación Sanitaria Princesa (IP), Madrid, Spain
Vascular Pathophysiology Area, Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares (CNIC), Madrid, Spain
Centro de Investigación Biomédica en Red de Enfermedades Cardiovasculares (CIBERCV), Spain
Ibiza S:
Immunobiology Unit, Instituto de Medicina Molecular, Faculdade de Medicina de Lisboa, Lisbon, Portugal
Ortega Á:
Dpt. de Fisiología, Universitat de Valencia, Burjassot, Spain
Izquierdo-Álvarez A:
Servicio de Inmunología. Hospital Universitario de la Princesa, Universidad Autónoma de Madrid, Instituto de Investigación Sanitaria Princesa (IP), Madrid, Spain
Trullo A:
Unidad de Microscopía, CNIC, Madrid, Spain
Center of Experimental Imaging, Ospedale San Raffaele, Milan, Italy
:
Dpt. de Fisiología, Universitat de Valencia, Burjassot, Spain
Servicio de Endocrinología y Nutrición, Hospital Universitario Dr. Peset Aleixandre, Fundación para la Promoción de la Investigación Sanitaria y Biomédica de la Comunidad Valenciana (FISABIO), Valencia, Spain
Calvo E:
Centro de Investigación Biomédica en Red de Enfermedades Cardiovasculares (CIBERCV), Spain
Laboratorio de Proteómica Cardiovascular, CNIC, Madrid, Spain
Sot B:
Fundación IMDEA-Nanociencia, Madrid, Spain
Centro Nacional de Biotecnología (CNB-CSIC)-IMDEA Nanociencia Associated Unit, Madrid, Spain
Martínez-Ruiz A:
Servicio de Inmunología. Hospital Universitario de la Princesa, Universidad Autónoma de Madrid, Instituto de Investigación Sanitaria Princesa (IP), Madrid, Spain
Centro de Investigación Biomédica en Red de Enfermedades Cardiovasculares (CIBERCV), Spain
Vázquez J:
Centro de Investigación Biomédica en Red de Enfermedades Cardiovasculares (CIBERCV), Spain
Laboratorio de Proteómica Cardiovascular, CNIC, Madrid, Spain
Sánchez-Madrid F:
Servicio de Inmunología. Hospital Universitario de la Princesa, Universidad Autónoma de Madrid, Instituto de Investigación Sanitaria Princesa (IP), Madrid, Spain
Vascular Pathophysiology Area, Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares (CNIC), Madrid, Spain
Centro de Investigación Biomédica en Red de Enfermedades Cardiovasculares (CIBERCV), Spain
Serrador JM:
Dpt. Biología Celular e Inmunología, Centro de Biología Molecular "Severo Ochoa" (CBMSO), CSIC-UAM, Madrid, Spain
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